进实验室第一天就被师兄抛过来一句,问我知不知道od600是什么意思,当时脑子一片空白,只能含糊的点头,手里攥着移液枪,连枪头都没卡稳,心里只觉得这个代号听起来简单,实际摸起来到处都是说不清的别扭。
最开始想当然的以为,这个数值直接就是菌的数量,测出来多少,试管里面就有多少菌体,配好培养基摇起来,隔半小时就跑去分光光度计那边测一次,记在本子上,一笔一笔写的密密麻麻,还特意画了坐标轴,打算直接照着读数画生长曲线,连着两天泡在摇床旁边,定时取样稀释,忙活到大半夜,结果拿给师兄看的时候,他只扫了一眼,就说我想的太简单了。
稀释倍数没把控好的时候,读数飘的离谱。
同一个菌液,一次稀释十倍,一次稀释二十倍,测出来换算之后对不上,来回测了三四遍,机器屏幕上的数字跳来跳去,一会高一会低,越测越慌,怀疑是比色皿没擦干净,拿滤纸反复擦透光面,擦的都有点发毛,又怀疑菌液沉淀了,取样之前使劲晃试管,晃到管壁全是小气泡,倒进比色皿里面,气泡粘在侧壁,测出来的结果还是不对,那个时候才慢慢意识到,od600不是一个可以直接等同活菌数的数字,它测的是透光之后的浊度,死菌碎片、培养基里面的沉淀碎屑,全都能让读数往上走。
旁边工位的师姐和我做法不一样,她每次测完od之后,都会同步涂平板计数,两个数据放在一块对照,她说浊度只是一个粗略参考,同一个菌株、同样的培养条件下,它才勉强有参考价值,换了培养基,或者摇床转速温度变一点,对应关系就乱掉了。我当时还不太服气,觉得多测几次总能找到稳定的换算比例,连着好几批摇菌都一边测浊度一边涂板,平板孵育的那十几个小时,心里一直惦记,第二天去数菌落的时候,才看见有的平板菌落长的连成片,根本数不清,这一批的数据直接废掉,白白熬了一个晚上。
有时候摇菌摇过头,菌液看着很浑浊,od读数很高,平板上能长出来的活菌反而变少,菌体老化裂解,碎渣悬浮在液体里面,浊度上去了,真正能用的活菌已经不多,踩过这个坑之后,再看到屏幕上面的数字,不敢再直接当成菌量来判断。有一回赶实验节点,着急转接种子液,凭着之前记下的od数值直接转接,后续摇出来的菌活性很差,后续的诱导步骤完全没有出想要的结果,整套流程从头重来,耽误了整整三天的进度。
就是这个地方最容易卡住人。
慢慢的不再执着于算出一个固定的换算系数,只是把od600当成自己这套实验里面一个顺手的标记,每次摇菌,就固定自己的操作习惯,取样的位置、摇晃的力度、稀释的方式全都保持一致,只在自己这套条件里面,拿它判断什么时候适合转接、什么时候适合诱导,换别的菌株,或者换配方的培养基,就不敢沿用之前记下的经验,也不敢拿着这个数值去和别人的数据直接比对,不同实验室之间的比色皿、仪器本身也有差别,同一个菌液拿到两台机器上面测,出来的读数都会有一点偏差。
本子上还留着很多作废的记录,有的时候稀释太多,读数太低落在仪器不太灵敏的区间,误差变大,有时候浓度太高,超出线性范围,数值不再跟着菌量同步上涨,这些都是一次次取样测样的时候慢慢碰出来的感受,没有人一次性把这些细碎的局限讲全,大多都是自己在分光光度计前面等读数、换样品的时候一点点体会到的。
也会在网上翻别人发出来的笔记,很多地方写的很干脆,给一个od对应cfu的换算值,最开始照着用,栽了跟头之后才明白,那些数字只是别人在他自己的实验体系里面跑出来的,挪到我这边,不一定能行。这只代表我自己在做细菌培养这段时间遇到的情况,别的人做别的微生物,感受和操作习惯都会不一样。
后面再听见别人问od600是什么意思,不会再急着给一句干脆的解释,只会想起当初盯着仪器跳动的数字,反复稀释反复重测,平板长出来之后看着密密麻麻菌落发呆的那些傍晚。